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1.項目背景

糖類抗原(carbohydrate antigen 19-9，CA19-9)是一種粘蛋白型的糖類蛋白腫瘤標(biāo)志物，為細(xì)胞膜上的糖脂質(zhì)，因由鼠單克隆抗體116NS19-9識別而命名。是迄今報道的對胰腺癌敏感性較高的標(biāo)志物。在血清中它以唾液粘蛋白形式存在，分布于正常胎兒胰腺、膽囊、肝、腸和正常成年人胰腺、膽管上皮等處。是存在于血液循環(huán)的胃腸道腫瘤相關(guān)抗原。

《中國胰腺癌診治指南（2021）》指出：血清 CA19-9 是目前常用的胰腺癌診斷標(biāo)記物，其診斷胰腺癌的敏感度為79%～81%，特異度為82%～90%。由于CA19-9 在膽道梗阻及感染狀態(tài)下亦可異常升高，故應(yīng)在黃疸緩解、炎癥控制后再對其進(jìn)行基線檢測。血清CA19-9水平可在一定程度上反映腫瘤負(fù)荷或提示有微轉(zhuǎn)移灶的可能。除診斷意義外，CA19-9還有助于評估預(yù)后及療效。胰腺癌病人術(shù)后血清CA19-9 水平升高雖可提示復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移，但仍應(yīng)結(jié)合影像學(xué)證據(jù)等進(jìn)行綜合判斷。約10%的胰腺癌病人為Lewis抗原陰性血型結(jié)構(gòu)，此類病人不表達(dá)CA19-9，須結(jié)合其他腫瘤標(biāo)記物協(xié)助診斷。癌胚抗原診斷胰腺癌的特異度與 CA19-9 類似，但敏感度僅為44.2%。CA125升高與胰腺癌術(shù)后早期遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移相關(guān)，一定程度上反映出腫瘤轉(zhuǎn)移潛能及其相關(guān)負(fù)荷，特別對CA19-9表達(dá)陰性的胰腺癌病人，CA125具有一定的預(yù)后評估價值。其他臨床常用的腫瘤標(biāo)記物還有 CA50、CA242、CA724等，聯(lián)合應(yīng)用有助于提高診斷敏感度和特異度，但仍需證據(jù)支持。

2. 性能表現(xiàn)（化學(xué)發(fā)光（吖啶酯）平臺）

2.1 抗體配對組合：

糖鏈抗原CA19-9（貨號：EKY0018N）包被羧基磁珠+糖類抗原CA19-9（貨號：EKY0018O）標(biāo)記吖啶酯；

2.2 具體指標(biāo)

參考《YY/T 1178-2010 糖類抗原CA19-9定量測定試劑（盒）（化學(xué)發(fā)光免疫分析法）》

a. 低檢出限：不高于2.0U/mL。

用零濃度校準(zhǔn)品或樣本稀釋液作為樣本進(jìn)行檢測，重復(fù)測定20次，得出20次測量結(jié)果的RLU值(相對發(fā)光值)，計算其平均值(M)和標(biāo)準(zhǔn)差(sD)，得出M+2SD，根據(jù)零濃度校準(zhǔn)品和相鄰校準(zhǔn)品之間的濃度一RLU值結(jié)果進(jìn)行兩點回歸擬合得出一次方程，將M+2SD的RLU值帶入上述方程中，求出對應(yīng)的濃度值，即為低檢測限。

CA19-9 低檢出限
空白樣本（n=20）		發(fā)光值
1		2607
2		2316
3		2371
4		2353
5		2414
6		2468
7		2299
8		2670
9		2189
10		2556
11		2221
12		2358
13		2429
14		2290
15		2304
16		2374
17		2317
18		2384
19		2285
20		2267
Mean		2374
SD		123.6
M+2SD		2621
10.6 U/mL	1	32734
	2	31390
	3	30977
	Mean	31700
低檢出限 U/mL		0.07

b. 重復(fù)性：分別為2.9%及2.8%。

用 40U/mL±8U/mL和 150U/mL±30U/mL的樣本各重復(fù)檢測10次，計算10次測量結(jié)果的平均值M和標(biāo)準(zhǔn)差SD，根據(jù)公式CV=SD/M*100％得出變異系數(shù)CV。其變異系數(shù)(CV)應(yīng)不大于10％(儀器自動操作法)或不大于15％(手工操作法)。

CA19-9 重復(fù)性
序號	發(fā)光值	濃度值U/mL	發(fā)光值	濃度值U/mL
1	112817	40.73	490445	174.91
2	112570	40.64	488938	174.38
3	105906	38.24	497560	177.43
4	111795	40.36	478194	170.57
5	110967	40.06	472592	168.59
6	109292	39.46	488909	174.37
7	104306	37.66	469210	167.39
8	109133	39.40	477034	170.16
9	105000	37.91	451853	161.25
10	110520	39.90	491164	175.17
M	109230.6	39.44	480589.9	171.42
SD	3135.5	1.1	13636.1	4.8
CV	2.9%	2.9%	2.8%	2.8%

c. 線性范圍：1 U/mL-1000 U/mL。

將接近線性范圍上限的高值樣本按一定比例稀釋為至少5種濃度，其中低值濃度的樣本須接近線性范圍的下限。按試劑(盒)說明書進(jìn)行操作，每一濃度重復(fù)檢測2次，計算平均值，將結(jié)果平均值和稀釋比例用二乘法進(jìn)行直線擬合，并計算線性相關(guān)系數(shù)r。

線性范圍上限不應(yīng)低于參考值的5倍，下限應(yīng)低于參考值的1/5（參考羅氏CA19-9參考值為27 U/mL (第95百分位數(shù))、34 U/mL (第97.5百分位數(shù))、39 U/mL (第99百分位數(shù))）。在生產(chǎn)企業(yè)所規(guī)定的線性范圍內(nèi)，試劑(盒)的相關(guān)系數(shù)r應(yīng)≥0.99。

CA19-9 線性
線性	實測值均值U/mL	理論值U/mL
線性1	1.60	0.91
線性2	4.95	3.64
線性3	19.28	14.57
線性4	73.82	58.29
線性5	264.28	233.17
線性6	932.67	932.67
線性相關(guān)系數(shù)r		0.9994

d. 回收率：98.3%。

將濃度約為200U/mL(允許偏差為±20％)的糖類抗原CA19-9樣品(A)加入血清或其他相應(yīng)的基質(zhì)樣品B中，所加入A的體積宜不超過總體積（A+B）的10%。

回收率應(yīng)在(85％～115%)范圍內(nèi)。

序號	混合樣本U/mL	低值樣本U/mL	高值樣本U/mL
1	37.58	23.04	174.91
2	37.04	22.11	174.38
3	37.87	22.33	177.43
均值	37.50	22.49	175.57
回收率	98.3%

3.臨床相關(guān)性（化學(xué)發(fā)光（吖啶酯）平臺）

西寶生物發(fā)光平臺CA19-9抗體配對與Roche CA19-9試劑賦值的臨床樣本（高值部分）相關(guān)性R²>0.95，相關(guān)性良好；低值部分（≤100 U/mL）相關(guān)性R²>0.95，相關(guān)性同樣較好。

4.測試方案

特別注明：

1）若客戶采用吖啶酯體系，建議CA19-9抗體與吖啶酯的標(biāo)記摩爾比在1:4左右；

2）若客戶采用堿性磷酸酶或辣根過氧化物酶體系，建議優(yōu)化酶與抗體標(biāo)記的摩爾比例。

待測樣本:加樣量20ul；

試劑1：糖類抗原CA19-9（貨號：EKY0018N）-磁珠稀釋物，用量50ul/測試；

試劑2：糖類抗原CA19-9（貨號：EKY0018O）-吖啶酯稀釋物，用量50ul/測試；

反應(yīng)條件：

第一步：20ul樣本+50ul試劑1混合，37℃孵育9min，清洗；

第二步：加入50ul試劑2混合，37℃孵育9min，清洗；

第三步：加入預(yù)激發(fā)液及激發(fā)液，進(jìn)行測試。

測試使用發(fā)光儀器:科斯邁SMART 500S；可適用于各類吖啶酯體系的化學(xué)發(fā)光儀器（如四川邁克、深圳亞輝龍、山東康華生物、基蛋生物、南京諾爾曼等）

5.產(chǎn)品信息(可提供大包裝試劑)

產(chǎn)品名稱	貨號	推薦配對
糖類抗原CA19-9單克隆抗體	EKY0018N	糖類抗原CA19-9（貨號：EKY0018N）包被羧基磁珠+糖類抗原CA19-9（貨號：EKY0018O）標(biāo)記吖啶酯（抗體配對組合）
糖類抗原CA19-9單克隆抗體	EKY0018O
糖類抗原CA19-9抗體（貨號：eky 0018N）-羧基磁珠濃縮液	DKY1318A
糖類抗原CA19-9抗體（貨號：EKY0018O）-吖啶酯濃縮液	DKY1318B
羧基磁珠(超順磁)，1um	DEG0091B-1-100mg
羧基磁珠(超順磁)，3um	DEG0091A-3-100mg

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